И все-таки

[ver_nun_ftig]

И все-таки я была права - http://ver-nun-ftig.livejournal.com/80554.html

Если у вас не идет ПЦР, это значит, что у вас банально нет матрицы. Решили мы вытащить из одноклеточной водоросли Chlamydomonas reinhardii (зелененькой такой, миленькой, с двумя усиками, нравится мне очень) ген, кодирующий тубулинполиглутамилазу. Это такой фермент, который навешивает много-много остатков глутаминовой кислоты на С-конец тубулина. Решили, потому что вышла статья, в которой показали, что мутация в этом гене приводит с уменьшению полиглутамилирования тубулина и что кДНК, введенная в клетку на плазмиде, восстанавливает нормальный уровень полиглутамилирования. Отлонированную кДНК нам прислать отказались. Но мы не очень расстроились. Что нам стоит самим вытянуть кДНК? Сказано-сделано - заказали праймеры (сначала свои, а потом уже и точно по статье), тянем-потянем, вытащить не можем. Ни с RT, ни из кДНК-овой библиотеки. Что за хрень? Огромного тринадцатикилобазного монстра вытянули, а тут какая-то бздюлина на полторы килобазы никак не дается. Полезла я в последнюю версию хламидного генома за каким-нибудь надежным контролем. Дай, думаю, гляну, что последняя версия про мою полиглутамилазу говорит. Опаньки - по последней версии хламидного генома кДНК чуточку длиннее и место, где начинается кДНК, описанная в статье, находится аккуратно в середине первого интрона. Заказала новые праймеры и с первой же попытки вытянула. Теперь мне очень интересно: если авторы статьи действительно тащили кДНК из RT, то как им это удалось? А если они все-таки сжульничали и просто синтезировали кДНК по предсказанной последовательности, почему об это честно не написали в статье?

А вот и моя любица