ver_nun_ftig | Chlamydomonas outer-arm dynein

Да что же это за белок такой заколдованный! Эй вы там, наверху! Покажись, кому это так не хочется, чтобы я его экспрессировала и начистила!
Сначала я никак не могла вытащить его кДНК, даже в расчлененном виде. Потом был период затишья и клонирование этого монстра в экспрессионный вектор прошло на удивление легко. Потом я никак не могла трансфецировать клетки насекомых. Потом выяснилось, что это только с одним тагом такая фигня, а с другими все идет как по маслу. Потом выяснилось, что клеткам насекомых этот белок очень не нравится и они его изничтожают быстрее, чем производят. Но все-таки осталась надежда, что если прицепить ему таг не только на голову, но и на попу, в два этапа сколько-нибудь полноразмерного начистить удастся. И вот наконец пришло время препаративной инфекции (тут надо отметить, что с момента получения плазмиды до момента препаративной инфекции проходит месяц). Я уже запланировала очистку на четверг. И тут - па-дам! Инкубатор, в котором качалась моя культура, ломается и охлаждает мои клеточки до температуры, несовместимой с их жизнью! И не только мою культуру, но и культуру, предназначенную на развод. Теперь придется еще бог знает сколько времени ждать, пока я смогу опять инфицировать препаративные количества.
Я опять начала скучать по дрожжам. С ними, конечно, все не так быстро, как с кишечной палочкой, типа, "вечером посеял - утром понял "сам дурак"", но все же счет идет не на недели и месяцы. А тут, с этим бакуловирусом месяц-полтора вынь да полож. А для того, чтобы приготовить трансформацию Chlamydomonas, нужно две недели. И потом еще неделю ждать, пока что-то вырастет. Или не вырастет.